Фрагментация днк спермограммы: в чем смысл анализа, как проводится исследование и лечение?

ОЦЕНКА ПОВРЕЖДЕНИЯ ДНК СПЕРМАТОЗОИДОВ

Повреждение спермальной ДНК означает потерю целостности структуры всей молекулы ДНК сперматозоида.

• Термином «повреждение ДНК сперматозоидов» обозначают многие дефекты структуры хроматина, в том числе разрывы одной, или двух спиралей молекулы ДНК, делеции, или видоизменения, образование дополнительных связей в спирали, или между спиралями ДНК, и неправильное размещение протаминов из-за дефектного крослинкинга ДНК и белков.

Повреждение хроматина может произойти на любом этапе сперматогенеза, спермиогенеза, при прохождении через эпидидимис, а in vitro — во время подготовки сперматозоидов к искусственному оплодотворению.

• Дефектные сперматозоиды, содержащие поврежденную ДНК, сохраняют способность к оплодотворению. Однако с такими повреждениями ДНК связаны некоторые формы бесплодия, например, идиопатическое бесплодие, повторяющиеся неудачи внутриматочной инсеминации (ВМИ) и ЭКО, привычные выкидыши. Более того, с повреждениями ДНК спермы связан повышенный риск раковых заболеваний и передающихся дефектов у потомства.

Из множества предполагаемых на сегодняшний день причин, вызывающих нарушение функции сперматозоидов, повреждение ядерной ДНК – наиболее изученная и все более признаваемая в качестве ключевого фактора, влияющего на качество эмбриона, его развитие и имплантацию. Вы можете ежедневно сдать анализ на фрагментацию ДНК в Лаборатории Клинической Андрологии.

Стоимость анализа на фрагментацию ДНК:

Анализы	Цена
ДНК фрагментация сперматозоидов	7000	Записаться на прием

• Повреждения спермальной ДНК связаны с параметрами спермограммы: снижением концентрации, подвижности и доли нормальных форм сперматозоидов. В то же время в 10-20% случаев могут иметь место при «нормозооспермии».

Ведущая причина повреждения ДНК – оксидативный стресс сперматозоидов, вызванный избыточной продукцией активных форм кислорода (см. рисунок по Aitken RJ et al., 2014).

Другая причина – незавершенный апоптоз сперматозоидов, связанный с нарушениями спермато- и спермиогенеза, и/или элиминацией дефектных форм в эпидидимисе.

По Aitken RJ et al. // Asian J Androl. 2014, 16 (1): 31.

• Повреждение ДНК спермы — это многофакторный процесс, зависящий как от генетической предрасположенности, так и от внешних повреждающих факторов (курение, перегревание, токсические вещества и др.).

Поскольку это может иметь несколько причин, оценка фрагментации, оксидативного стресса и нарушений конденсации (упаковки) хроматина особенно рекомендуются для:

• пар с историей выкидышей;
• пар с необъяснимым бесплодием более 6 месяцев;
• мужчин старше 40 лет;
• пациентов с варикоцеле;
• пациентов с системными заболеваниями (диабет, ожирение и др.);
• мужчин с вредными факторами образа жизни (курение, ионизирующее излучение, токсические вещества, перегревание, в т.ч. при использовании облегающей одежды, несбалансированное питание и др.);
• мужчин с историей рака и химиотерапией;
• мужчин, проходящих лечение некоторыми рецептурными препаратами;
• у мужчин, перенесших урогенитальные инфекции;
• плохом качестве эмбриона во время повторных циклов донорства яйцеклеток;
• мужском идиопатическом бесплодии.

• Для обнаружений повреждений ДНК в сперматозоидах используют различные методы: дисперсии хроматина в агарозном геле (SCD), электрофореза ДНК после денатурации (COMET), терминальной метки (TUNEL) и др.

В таблице мы суммировали принципы и интерпретации наиболее широко используемых тестов.

Метод	Принцип исследования	Размерность получаемых результатов	Нормальные значения
Метод TdT-опосредованной метки dUTP-конца разрыва цепи ДНК(метод TUNEL)	Измеряет степень повреждение ДНК путем включения встраивания ДНК зонда (модифицированного нуклеотида) в место повреждения ДНК	Доля сперматозоидов с повреждениями ДНК, которые несут модифицированый нуклеотид, встроенный в разрыв ДНК	Меньше 20 %,
Анализ структуры хроматина сперматозоида (метод SCSA)	Измерение подверженности ДНК к денатурации	Количество сперматозоидов с фрагментированной ДНК в %	Меньше 30 %
Анализ дисперсии хроматина сперматозоида (метод SCD)	Измерение подверженности ДНК к денатурации	Количество сперматозоидов с фрагментированной ДНК, %	Меньше 15%
Метод ДНК-комет (COMET)	Измерение подверженности ДНК к денатурации	Степень фрагментации ДНК в отдельном сперматозоиде оценивается по доле ДНК в хвосте кометы, длине хвоста и интенсивности окраски	Не определено
Окрашивание анилиновым синим и хромомицином А3	Измерение уровня компактизации хроматина сперматозоидов на основе соотношения гистонов и протаминов	Количество сперматозоидов с низкой компактизацией хроматина, %	Меньше 30% ИндексG0+G1+G2x2 меньше 40

Для оценки фрагментации ДНК исторически первым более 35 лет назад начали применять метод SCSA. Для научных целей наиболее часто применяют метод TUNEL, способный выявлять как одноцепочечные разрывы, так и двуцепочечные разрывы ДНК. Самый современный и удобный для клинического применения – метод SCD; некоторые считают его также самым чувствительным.

Конденсацию (упаковку) хроматина сперматозоидов оценивают по соотношению белков гистонов и протаминов в сперматозоидах, для чего применяют окраску анилиновым синим и хромомицином 

Оригинальные фото из нашей лаборатории:

А- TUNEL; Б- SCD; В-гистоны/протамины

Обнаружение повышенной фрагментации ДНК сперматозоидов требует лечения, направленного на устранение предполагаемого патогенетического фактора: инфекционно-воспалительных процессов, и даже бессимптомного носительства таких инфекций, как Chlamydia trachomatis, Mycoplasma sp., Ureaplasmаurealyticum, некоторых серотипов E.coli и др.

, перегревания яичек (в т.ч. связанного в варикоцеле), курения, действия некоторых лекарственных средств (paroxetine,miloxan, pentoxyphylline и др.), избыточного веса, нарушения углеводного обмена и др. В случае обнаружения оксидативного стресса – дополнительно применение различных нутриентов-антиоксидантов.

В самых сложных случаях может быть полезным получение сперматозоидов непосредственно из яичек, где они защищены от действия активных радикалов гемато-тестикулярным барьером.

Но в этом случае последующие неудачи ЭКО ИКСИ могут быть связаны с нарушением упаковки хроматина, поскольку необходимая для полноценного созревания сперматозоидов замена гистонов на протамины происходит уже в придатках яичек.

Последние годы для нормализации структуры хроматина сперматозоидов достаточно эффективно используются современные клеточные технологии, в т.ч. связанные с применением МСК и клеток Сертоли.

Доктор мед. наук, профессор В.А. Божедомов

Несколько цитат о значении фрагментации ДНК сперматозоидов:

• «…В сперматозоидах у мужчин с олигозооспермией увеличивается повреждение ДНК. Это увеличение связано с уменьшением шансов естественной беременности и увеличением вероятности ранней потери беременности…»

Male Infertility / A. Jungwirth (Chair) et al. ©

European Association of Urology, 2017: 14.

• «…Существует два типа фрагментации ДНК сперматозоидов, из которых один зависит от параметров спермограммы, а второй – нет…»

Muratori M. et al.// Hum. Reprod., 2008, V23 (5), p.1035-1043.

• «…Дефектные сперматозоиды, содержащие поврежденную ДНК, сохраняют способность к оплодотворению. Однако с такими повреждениями ДНК связаны некоторые фенотипы бесплодия, например, необъяснимое и идиопатическое бесплодие, повторяющиеся неудачные ВМИ и ЭКО, и привычные выкидыши. Более того, с повреждениями ДНК спермы связан повышенный риск раковых заболеваний и передающихся дефектов у потомства…»

Sperm chromatin: biological and clinical application in male infertility and assisted reproduction / A.Zini, A.Agarwal (Ed.), 2011, Springer, 512.

• «…Из множества предполагаемых на сегодняшний день причин, вызывающих нарушение функции сперматозоидов, повреждение ядерной ДНК – наиболее изученная и все более признаваемая в качестве ключевого фактора, влияющего на качество эмбриона, его развитие и имплантацию…»

Mallidis C. et al.// Hum Reprod., 2010, V.26, N7, P.1641-1649

• «…Сперматозоиды с фрагментированной ДНК могут оплодотворять зрелые ооциты, но активация генома отцов может нарушать эмбриональное развитие, приводя к предимплантационным и постимплантационным потерям. Этот тип повреждения может возникнуть у эмбрионов с нормальным комплементом хромосом и, возможно, объяснить, почему некоторые эмбрионы с нормальными кариотипами не способны обеспечить беременность у пациентов с необъяснимыми выкидышами. В целом, чем больше степень повреждения ДНК передается эмбриону отцовским геномом, тем раньше этот ущерб будет проявляться во время развития эмбриона…»

Bareh Gihan M. еt al.// Fertility and Sterility, 2016, 105 (2): 15-282

• «…Недавние исследования показали важность целостности ДНК спермы как важного фактора, который влияет на функциональную компетентность спермы. Поэтому обнаружение фрагментации ДНК сперматозоидов может быть клинически полезным, как часть процесса оценки фертильности … Тесты фрагментации ДНК спермы практически не имеют разницы в прогнозируемом значении между IVF и ICSI…»

Cissen M et al. Measuring Sperm DNA Fragmentation and Clinical Outcomes of Medically Assisted Reproduction: A Systematic Review and Meta-Analysis. PLoS One. 2016 Nov 10; 11(11):e0165125.

• «…Современные модели на животных и экстраполяционные данные в исследованиях на людях вызывают озабоченность проблемами со здоровьем у потомства, полученного из спермы, с повышенным уровнем фрагментации ДНК…»

Bach PV, Schlegel PN. Sperm DNA damage and its role in IVF and ICSI. Basic Clin Androl. 2016, 5 (26): 15.

• «…Уникальный процесс уплотнения хроматина в сперматозоиде имеет важные последствия как для развития скрининговых тестов мужского бесплодия, так и для понимания характеристик хроматина спермы, которые могут повлиять на результаты вспомогательных репродуктивных технологий…»

Palermo GD et al. Perspectives on the assessment of human sperm chromatin integrity. Fertil Steril. 2014 Dec; 102(6):1508-17.

• “…Мета-анализ с двумерным случайным эффектом дал значение AUC (площадь под кривой) 0,92 с чувствительностью (доверительный интервал 95%) 0,80 (0,78-0,82) и специфичностью 0,83 (0,80-0,86) для использования теста SDF в дифференциации бесплодных мужчин от нормального фертильного контроля. Более того, анализ подгрупп показал, что анализ SDF с одним тестом TUNEL привел к величине AUC 0.9506 с объединенной чувствительностью 0.77 (0.74-0.8) и специфичностью 0.91 (0.87 — 0.94), в то время как тесты SCD и Comet отображали комбинированную чувствительность 0,77 (0,67-0,81) или 0,91 (0,88-0,94) и специфичность 0,84 (0,75-0,91) или 0,63 (0,54-0,70), сопровождаемая величиной AUC 0,84 или 0,94…»

Cui ZL et al. Diagnostic Accuracies of the TUNEL, SCD, and Comet Based Sperm DNA Fragmentation Assays for Male Infertility: a Meta-analysis Study. Clin Lab. 2015; 61(5-6): 525-35.

Фрагментация ДНК сперматозоидов — сдать анализ

HALO-тест это актуальный метод оценки целостности ДНК. Поэтому сначала мы рассмотрим его. В отличие от других методов, HALO выявляет и “подсвечивает” не поврежденную, а целую ДНК. Вокруг “здоровых” сперматозоидов с неповрежденной ДНК формируется ореол, который отчетливо виден на оптическом микроскопе.  Таких ореолов нет у мужчин с поврежденной ДНК.

Анализ выполняют спустя 30-60 минут после разжижения эякулята. Оценивают от 200 до 500 сперматозоидов с хвостами (незрелые не оценивают).

Здоровые сперматозоиды подсвечиваются большим и четким ореолом

У сперматозоидов с неповрежденной ДНК-молекулой есть четкий большой ореол. У сперматозоидов с фрагментацией (разрывами) ДНК такого ореола нет или он не четкий.

В основе теста HALO лежит метод SCD (запатентован компанией Halotech) . На сегодняшний момент этот метод активно используется в клинической практике и участвует во множестве клинических испытаний. HALO считается более чувствительным тестом, по сравнению с остальными.

• Референсное значение (норма)  для этого теста – 20% и ниже.
• Это значит, что сперматозоидов с фрагментацией ДНК должно быть меньше 20% от общего количества.
• А если больше 20%? Читайте про расшифровку

Лаборант смешивает сперму со специальным реактивом, запуская тем самым процесс денатурации ДНК, а затем окрашивания. Если ДНК спермы не повреждена (не фрагментирована), вокруг плотного центрального ядра ДНК образуется четкий «ореол».

Если ДНК спермы имеет разрывы, то ореола нет, даже если он проявляется, то очень тонкий и неясный. Это хорошо видно под микроскопом, когда сперматолог-эмбриолог считает сперматозоиды с фрагментированной ДНК.

Результат подсчета выражается в процентах, и в норме он не должен быть более 20%.

Для полноты обследования параллельно с анализом фрагментации ДНК обычно выполняют спермограмму и ЭМИС (электронно-микроскопическое исследование спермы). Если они были сделаны ранее, но не более 3 месяцев назад, покажите их врачу на консультации. Все 3 анализа можно провести из одной порции спермы.

1. Подготовка подразумевает воздержание в течение 2–5 дней.
2. Метод сбора эякулята — мастурбация.
3. Ёмкость для сбора эякулята — стерильный контейнер (бесплатно у администратора лаборатории)
4. Непосредственно перед сбором материала нужно освободить от содержимого мочевой пузырь и помыть половые органы

Если тест проводится неоднократно, продолжительность воздержания должна быть всегда одинаковой. Это важно для сравнения результатов в динамике.

Если образец собирается дома, то доставить контейнер в лабораторию должен курьер в контейнере, поддерживающим температуру.

У каждого теста свои нормы (референсные значения). После проведения исследования формируется протокол, где указан индекс фрагментации ДНК.

Ниже описаны варианты результатов и рекомендации по тактике лечения. Эти рекомендации основаны на исследованиях, проводимых реальными научными группами за последние 10 лет. Это ценный исследовательский опыт, но это все равно только рекомендации. Интерпретировать результаты должен ваш лечащий врач и исходя из истории болезни предлагать варианты лечения.

Что показывает индекс фрагментации? Он отражает процентное соотношение между «здоровыми» сперматозоидами и сперматозоидами с разрывами в ДНК-цепочках.

Рассмотрим расшифровку на примере норм для HALO-теста.

Результат анализа считается нормальным, если индекс фрагментации не превышает 20%. Это означает, что количество половых клеток с поврежденной ДНК составляет не более 20% от общей их численности. Существует высокая вероятность наступления здоровой беременности естественным путем.

Если индекс фрагментации повышен и находится в пределах от 20% до 30%, естественное оплодотворение возможно, но не исключено, что для этого потребуется больше времени. Увеличен риск выкидыша из-за задержки или остановки развития плода.

Наступление беременности естественным путем маловероятно, если уровень фрагментации выше 30%, но ниже 50%. Рекомендовано использование технологии ЭКО.

Если результат выше 50% рекомендуется воспользоваться ИКСИ-технологией. При таких результатах ИКСИ будет эффективнее ЭКО.

Если результат выше 60% шансы на беременность даже с применением вспомогательных репродуктивных технологий крайне низкие. Лучше использовать сперму донора.

Если индекс фрагментации ДНК сперматозоидов равен 50% и более, даже при использовании репродуктивных технологий наступление беременности маловероятно.

Получили результат на руки? Покажите андрологу.

Популярные вопросы об индексе Фрагментации

Получил результат. Индекс фрагментации 21%. Что это значит?

Это случай пограничного результата. Нет повода для паники. Этот результат самый близкий к норме. Покажите заключение андрологу. Врач может назначить лечение антиоксидантами и рекомендовать оптимизировать образ жизни (режим работы и отдыха, снижение уровня стресса, прогулки на свежем воздухе и спортивная активность).

Фрагментация ДНК сперматозоида и мужское бесплодие

Одна из причин мужского бесплодия – это повреждение (фрагментация) цепочки ДНК, находящейся в ядре головки сперматозоида. Именно в молекуле этой нуклеиновой кислоты закодирована и хранится вся генетическая информация, которая при зачатии передается ребенку. И чем больше в молекуле ДНК таких разрывов, тем меньше вероятность оплодотворения яйцеклетки сперматозоидом. 

Фрагментация ДНК: что покажет спермограмма?

Спермограмма — золотой стандарт первичной оценки качества спермы. Нормы спермограммы не пересматривались с 2010 года.

С введением оценки морфологии по Крюгеру, этот анализ достиг максимальной диагностической значимости. Однако до сих пор спермограмма не может объяснить даже половины случаев мужского бесплодия.

Поэтому репродуктологам пришлось искать другие, более глубокие и конкретные методы исследования.

Диагностировать разрывы ДНК при проведении спермограммы невозможно. Сперматозоиды с поврежденной ДНК обычно сохраняют хорошую подвижность. Иногда они даже способны к оплодотворению, но наступившая беременность замирает или прерывается уже на ранних сроках.

За последние 10 лет наука убедилась, что повреждения ДНК сперматозоидов напрямую связаны с нарушениями оплодотворения, задержками развития эмбриона, плохой имплантацией, выкидышами. Т.е. со всеми сложностями наступления и начала протекания беременности.

К категории бесплодных относят не только пары с проблемами зачатия, но и с проблемами вынашивания (замершая беременность, повторяющиеся выкидыши). Вот в таких парах, при условии, что женщина здорова, мужчине ставят диагноз идиопатическое бесплодие, если не обнаруживают никаких выраженных патоспермий по результатам спермограммы. Идиопатическое — значит, что причина неизвестна.

У меня хорошая спермограмма. Не выявлено никакой патоспермии.

Зачем мне сдавать анализ на фрагментацию сперматозоида? Исследования 2016 года показали, что 10% мужчин с нормальными показателями спермограммы имели высокий индекс фрагментации ДНК сперматозоидов и входили в категорию пациентов с идиопатическим бесплодием (т.е.

бесплодие по неизвестным причинам). Поэтому есть вероятность, что у вас аналогичный случай. И тогда ваши сперматозоиды с нормальной подвижностью и морфологией будут усиливать шансы на успешную беременность.

Консультация андролога

Меньщиков Константин Анатольевич Андролог, уролог Куратор лаборатории сперматологии

Консультация при повышенной фрагментации ДНК сперматозоидов с коррекцией

4000 рублей

Повторная консультация

2000 рублей

Для кого

Для тех, у кого плохие результаты спермограммы или повышен индекс фрагментации ДНК сперматозоидов. Эффективные схемы лечения даже самых сложных случаев. Медикаментозная стимуляция и коррекция сперматогенеза. Успех — 87% случаев.

Кому назначают Исследование фрагментации ДНК?

Показания для назначения тестов на ДНК-фрагментацию:

• идиопатическое (необъяснимое) мужское бесплодие 
• замершая беременность (задержка развития эмбриона) 
• многократное и безуспешное ЭКОИКСИ
• повторяющиеся выкидыши 
• варикоцеле
• возраст мужчины 45 лет и более

Кроме того, тест на фрагментацию ДНК проводится перед замораживанием донорской спермы для оценки ее качества и во время подготовки к проведению ЭКО (экстракорпорального оплодотворения) или ИКСИ (интрацитоплазматического введения сперматозоидов).

Анализ фрагментации ДНК и ВРТ (ЭКО, ИКСИ)

Анализ фрагментаций ДНК помогает определить какой именно из методов вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) поможет конкретной паре. Так, парам, с низким и средним количеством повреждений ДНК у мужчины помогут внутриматочная инсеминация (IUI) и экстрокорпоральное оплодотворение.

А парам с высоким уровнем повреждения ДНК поможет ИКСИ (ICSI).

  Единственная группа пар, для которых анализ повреждений ДНК не принесет пользы это те,в которых у мужчины диагностирована и подтверждена олигоастенотератозооспермия (т.е. 3 патоспермии сразу).

Таким парам может помочь только ИКСИ и опытный андролог может сразу это сказать.

Анализ на фрагментацию ДНК необходим парам с идиопатическим мужским бесплодием. Т.е. когда диагностика устанавливает, что причина в мужчине, однако не может объяснить причину, поставить диагноз и назначить лечение.

Для пары с идиопатическим мужским бесплодием, фрагментация ДНК поможет сохранить время, не тратя его на неудачные попытки ЭКО, безрезультатные схемы лечения и общего укрепления организм.

Не тратьте время на пустое волнение, отчаяние и пустое ожидание.

Одним из наиболее изученных механизмов повреждений цепочек ДНК является действие свободных радикалов (активных форм кислорода). Они окисляют молекулу ДНК, нанося ей тем самым ущерб.

Чтобы внести ясность: свободные радикалы и повреждения ДНК есть у всех мужчин. Но в норме таких повреждений не много, а свободным радикалам должны противостоять антиоксиданты. Антиоксиданты защищают сперматозоиды, поглощая свободные радикалы. Ими богата семенная плазма — жидкость, в которой “плавают” сперматозоиды.

Чтобы выяснить как много таких потенциально опасных свободных радикалов в сперме мужчины, выполняют Исследование активных форм кислорода в нативном эякуляте (ROS) (т.е. так как он есть) или Исследование активных форм кислорода в отмытых сперматозоидах (ROS), отмывая сперматозоиды от семенной плазмы. Какой именно тест следует провести — может подсказать врач.

Чтобы выяснить насколько хорошо антиоксиданты противостоят свободным радикалам, выполняют анализ на антиокислительную активность семенной плазмы.

Что влияет на повышение фрагментаций ДНК?

Повреждения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты могут произойти как во время созревания мужской половой клетки, так и в зрелом ее состоянии. На появление разрывов цепочки ДНК влияют:

1. Внешние факторы:

• радиация и токсические химические вещества;
• перенесенные инфекции, в том числе передающиеся половым путем;
• неблагоприятные климатические и экологические условия в районе проживания;
• стресс и нездоровое питание;
• курение, злоупотребление алкоголем;
• варикоцеле; 
• возраст мужчины старше 40–45 лет; 
• хронические заболевания органов мочеполового тракта; 
• химиотерапия; 
• генетическая предрасположенность. 

• неполное созревание мужских половых клеток;
• в норме мужской организм сам отбраковывает большую часть некачественных сперматозоидов, и в эякулят попадают лишь единицы из них. Если по какой-то причине в работе системы по отбраковке происходит сбой, в сперме оказывается гораздо больше «больных» половых клеток. От этого качество эякуляции не страдает, но снижается вероятность успешного оплодотворения.

Существуют данные исследований, подтверждающие, что женская яйцеклетка, оплодотворенная сперматозоидом с фрагментированной ДНК, способна «вылечить» его, восстановить поврежденную генетическую структуру. Но успех такого «лечения» определяется, в первую очередь, биологическим возрастом и состоянием здоровья женщины. Только молодые яйцеклетки, имеющие высокий потенциал к восстановлению ДНК сперматозоида, способны устранить подобный дефект. Кроме того, большое значение имеют степень разрушения и характер повреждений генетических структур.

Главное различие между этими анализами заключается в том, что HALO подсвечивает сперматозоиды с «целой» ДНК, а TUNEL — с поврежденной. Есть так же отличие в чувствительности тестов в пользу HALO и времени выполнения. На анализ фрагментации ДНК методом HALO требуется в 5-7 раз меньше времени.

Индекс фрагментации в отличие от спермограммы показывает нарушения целостности цепочек ДНК. Поврежденная ДНК часто может быть у мужчин с хорошими результатами спермограммы.

Потому что сама молекула ДНК никак не влияет на основные параметры, тестируемые при анализе спермограмма: морфология, подвижность, количество сперматозоидов.

Почему анализы разные?

Как только была обнаружена значимая взаимосвязь фрагментации ДНК с проблемами на ранних сроках беременности, начались поиски универсального анализа. Новые методы анализа и исследований фрагментации ДНК появляются каждый год.

Все они должны пройти клинические исследования, доказать свою диагностическую значимость. В лаборатории СПЕРМА-ТЕСТ определение Индекса Фрагментации ДНК проводится методом HALO (HALOSPERM) .

Мы, как эксперты в области сперматологии рекомендуем использовать именно технологию HALO.

Что такое TUNEL-тест?

Tunel-тест – это микроскопическое исследование спермы, цель которого – обнаружить сперматозоиды с поврежденной ДНК и посчитать их количество.

Метод позволяет оценить масштаб повреждений ДНК в сперматозоидах. Сперма смешивается со специальным реактивом. Запускается ферментативная реакция. Разрывы цепочек ДНК сперматозоидов заполняются флуоресцирующим меченым нуклеотидом. Это видно под микроскопом, когда сперматолог считает сперматозоиды с фрагментированной ДНК.

Еще 2-3 года назад TUNEL-тест использовался повсеместно. Однако это был долгий и трудоемкий в выполнении тест. Сейчас более чувствительным и информативным считается тест HALO, что подтверждается клиническими исследованиями. А срок выполнения по сравнению с TUNEL сократился в 5-7 раз.

HALO-тест — это полная альтернатива тесту TUNEL. Новый тест быстрее и эффективнее. Поэтому мы рекомендуем использовать именно его. Однако не все андрологи и репродуктологи обадают информацией о HALO и требуют от пациентов результатов TUNEL-теста. Поэтому мы оставили TUNEL в списке услуг лаборатории.

HALO – это исследование, которое лучше выполнять в специализированной лаборатории, где работают сперматологи и эмбриологи, а не обычные лаборанты , соблюдаются международные стандарты проведения исследований и принципы доказательной медицины. Андрологи и репродуктологи не доверяют результатам сетевых лабораторий.

Сдать сперму для проведения HALO можно в лаборатории сперматологии Sperma-test.ru. Стоимость HALO-теста (альтернатива TUNEL) – 7000 р.

Адрес лаборатории где можно сдать анализ:

Адрес: г.Москва ул.Беговая д.7
м.Беговая

• Лаборатория сперматологии СПЕРМА-ТЕСТ
• Записаться на прием и задать вопрос можно по телефону: +7 495 199-7554

Специализированная лаборатория сперматологии Высокий профессиональный уровень, наличие собственной сертифицированной лаборатории, применение инновационных лечебно-диагностических технологий.

Услуги и цены

Запишитесь по телефону: +7 495 199-7554
Адрес: г.Москва ул.Беговая д.7
м.Беговая — 8-10 минут пешком
Часы работы лаборатории Пн — Вт 08:30-13:30
Ср — Пт 08:30-15:30
Сб — Вс 08:00-13:30

Запись по телефону: Пн — Вс 09:00-20:00

Все доктора и сотрудники лаборатории сперматологии имеют высокую квалификацию и многолетний опыт работы.

Запись к врачу

Дмитрий Вадимович Тикоцкий

Уролог, андролог

Запись к врачу

Эмбриолог-сперматолог

Запись к врачу

Тест на ДНК-фрагментацию сперматозоидов

Тест на ДНК-фрагментацию сперматозоидов
Мужское бесплодие зачастую имеет многофакторную природу и включает широкий спектр различных нарушений, которые затрагивают сразу несколько систем организма.

Наиболее важными считаются генетические факторы, определяющие развитие сперматозоидов. Плохое качество спермы влияет не только на сам процесс оплодотворения, но и на развитие зародыша, а также может приводить к развитию различных аномалий.

При этом риски увеличиваются при повреждении (фрагментации) ДНК половых клеток.

Мужское бесплодие зачастую имеет многофакторную природу и включает широкий спектр различных нарушений, которые затрагивают сразу несколько систем организма.

Наиболее важными считаются генетические факторы, определяющие развитие сперматозоидов. Плохое качество спермы влияет не только на сам процесс оплодотворения, но и на развитие зародыша, а также может приводить к развитию различных аномалий.

При этом риски увеличиваются при повреждении (фрагментации) ДНК половых клеток.

Методы изучения генетического материала половых клеток

Для того чтобы установить причину бесплодия или определить возможные риски, супруги проходят комплексное обследование, в которое может быть включен тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов. Он может проводиться разными способами. Наиболее распространенные из них:

У каждого метода есть свои особенности, однако в каждом случае можно выделить несколько одинаковых этапов.

Сначала мужчина сдает образец эякулята, затем сперматозоиды отделяются от семенной жидкости, обрабатываются специальным раствором, который денатурирует ДНК, после чего клетки изучаются под микроскопом.

При этом может быть использовано специальное программное обеспечение для подсчета результатов теста на фрагментацию ДНК сперматозоидов.

Причины патологии

Изменение структуры ДНК может развиваться по разным причинам. Их все можно разделить на две большие группы — внешние и внутренние. Группа внешних причин наиболее объемная. Она включает:

• специфические методы лечения (лучевая терапия, химиотерапия);
• сопутствующие заболевания репродуктивной системы, в частности варикоз яичка;
• работа во вредных условиях труда (высокая температура, химические вещества);
• вредные привычки и др.

К внутренним причинам относятся различные врожденные изменения в процессах, которые контролируют процесс созревания сперматозоидов. Как правило, такие изменения происходят на генетическом уровне, поэтому повлиять на них невозможно.

Определить точную причину повреждения половых клеток тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов не может. Однако исследование позволяет выявить саму проблему и подобрать оптимальный метод ее устранения. В последующем анализ может быть проведен повторно с целью оценки эффективности выбранной тактики лечения.

Показания для исследования

Тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов обычно включается в программу комплексного обследования пары в следующих случаях:

• невозможность забеременеть в течение года;
• многократное прерывание беременности на разных сроках;
• неудачные попытки ИКСИ и ЭКО;
• поздний отцовский возраст (более 45 лет);
• перед криоконсервацией спермы;
• при наличии у мужчины варикоцеле;
• при выявлении изменений в спермограмме.

Тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов можно сдать и без наличия показаний. Обычно исследование востребовано среди супружеских пар, которые проходят обследование перед беременностью и желают получить максимально полную информацию о состоянии своего здоровья, исключив тем самым возможные риски. В этом случае анализ проводится по желанию мужчины.

Как проводится тест на фрагментацию ДНК?

Перед исследованием необходимо пройти простую подготовку. Прежде всего, мужчина должен воздержаться от половых контактов, посещения бани и сауны, курения и употребления алкоголя за 3–5 дней до проведения теста на фрагментацию ДНК сперматозоидов.

За день до исследования следует отказаться от тяжелой физической работы.

Если накануне мужчина перенес острые инфекционные заболевания, если ему проводился массаж простаты или специфическое лечение (УВЧ-терапия), то исследование необходимо перенести на другой день.

Непосредственно в день проведения теста на фрагментацию ДНК сперматозоидов необходимо выполнить гигиену наружных половых органов и прийти в клинику к назначенному времени. Образец эякулята собирается путем мастурбации в стерильный контейнер, который затем отправляется на исследование в лабораторию.

Результаты теста на фрагментацию ДНК сперматозоидов выдаются в виде процентов. В норме фрагментированные половые клетки не должны превышать 15 %. Если этот показатель выходит за указанные границы, то мужчина направляется на консультацию к андрологу или репродуктологу.

???? Фрагментация ДНК сперматозоидов – сделать тест и провести исследование анализа в клинике GMS ЭКО в Москве, стоимость тестирования

Наиболее часто фрагментация ДНК связана со снижением содержания в хромосомах специальных белков — протаминов. Именно они придают ДНК сперматозоидов стабильную форму и обеспечивают ее транспорт. Существуют и другие факторы, определяющие появление разрывов в ДНК.

Сперматозоид — уникальная высокоспециализированная клетка с минимальным количеством цитоплазмы, высокочувствительная к условиям дозревания в придатке яичка, а именно к температурным, токсическим воздействиям и снижению антиоксидантной защиты в секретах половых путей.

Целостность структуры ДНК сперматозоида определяет развитие эмбрионов до имплантации, их качество, частоту наступления беременности и ее течение.

Сперматозоиды с высоким уровнем нарушения целостности ДНК могут благополучно оплодотворять яйцеклетку, но на ранних стадиях развития эмбриона (формирование бластоцисты и имплантация в эндометрий) процесс может остановиться как при естественном зачатии, так и в протоколах ЭКО и ИКСИ.

Когда следует оценить степень фрагментации ДНК сперматозоидов?

Изучение фрагментации ДНК сперматозоидов является эффективным диагностическим методом, выявляющим нарушения фертильности у мужчин.

Рекомендуется выполнить исследование в дополнение к рутинному анализу спермы, если

• имеет место бесплодие при исключении женского фактора и нормальных показателях спермограммы;
• наблюдается привычное невынашивание беременности (неразвивающиеся беременности) у супруги,
• были неудачные попытки использования ЭКО, ИКСИ;
• мужчине более 50 лет.

Как преодолеть повышенную частоту фрагментации ДНК в сперматозоидах?

Устраняем факторы, влияющие на повышение уровня фрагментации

Этому способствуют:

• здоровьесберегающий образ жизни: устранение факторов, влияющих на условия созревания сперматозоидов (особенности питания, нездоровые привычки, чрезмерная физическая активность, воздействие высоких температур -баня и сауна);
• частая половая жизнь. Есть данные, что индекс фрагментации увеличивается при увеличении времени пребывания сперматозоидов в семявыводящих путях, то есть, при увеличении промежутков между половыми актами. Идеально — секс ежедневно или даже чаще;
• лечение воспалительных и инфекционных заболеваний мужских половых органов;
• коррекция гормональных и иммунных нарушений, эндокринных расстройств; антиоксидантная терапия;
• хирургическая коррекция варикоцеле при наличии;
• исключение токсического воздействия на сперматогенный эпителий яичек (в том числе курения, алкоголя, вредных условий труда при их наличии).

Применяем дополнительные методы селекции сперматозоидов — отбор не просто лучших, а премиальных.

Здесь мы подробно рассказываем о технологии интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в яйцеклетку (ИКСИ), в которой яйцеклетка оплодотворяется специально отобранным сперматозоидом.

Еще более высокие требования к способности сперматозоида оплодотворить яйцеклетку, а именно к степени его зрелости, предъявляет метод ПИКСИ (physiologic ICSI, физиологическое ИКСИ).

Ооцит окружен оболочкой, основным компонентом которой является гиалуроновая кислота. Преодолеть этот природный барьер способен сперматозоид, имеющий на головке рецепторы, которые позволяют связаться с гиалуронатом.

По данным многочисленных исследований, только зрелые сперматозоиды с высокой степенью целостности ДНК и зрелым рецепторным аппаратом способны на это, что позволяет отбирать генетически состоятельные сперматозоиды.

Отбор сперматозоидов происходит в специальных чашках с микрокаплями гиалуроновой кислоты. Те сперматозоиды, которые способны связываться акросомами с молекулой гиалуроновой кислоты, далее используются в процедуре ИКСИ.

Используем хирургические способы получения высококачественных сперматозоидов

Ряд авторов продемонстрировали возможность использовать тестикулярные сперматозоиды для повышения эффективности протокола ИКСИ, поскольку у тестикулярных сперматозоидов показатель фрагментации ДНК ниже в сравнении с эякуляторными (12,6% у тестикулярных, 44,3% у эякуляторных)2. Метод может рассматриваться как альтернативный у мужчин с высокой степенью фрагментации ДНК, некорректируемой физиологическими и терапевтическими способами.

Для извлечения сперматозоидов из яичка применяются методики M-TESE (Microsurgical TEsticular Sperm Extraction) — открытая биопсия ткани яичка и экстракция сперматозоидов под микроскопом, и TESA (TEsticular Sperm Aspiration) — чрескожная аспирация сперматозоидов из яичка. Все операции малотравматичные, выполняются в условиях дневного стационара.

У нас применяется mTESE. Fresh-TESE — это когда получение и оплодотворение яйцеклетки производится в день получения сперматозоида (при m-TESE или при пункции придатка яичка), то есть без криоконсервирования половых клеток. Мы это тоже можем делать и делаем.

Если у вас есть дополнительные вопросы о фрагментации ДНК, запишитесь на консультацию к специалистам GMS ЭКО, оставив заявку по телефону или на сайте.

Диагностика сперматозоидов

Уже простое физиологическое обследование, включающее осмотр вторичных половых признаков (таких, как строение тела, рост волос) и пальпацию яичек, может дать врачу первые предположения о причинах бесплодия. Но самым важным является, несомненно, исследование сперматозоидов (спермограмма) и, при необходимости, исследование SFI (индекса фрагментации ДНК в сперме).

Спермограмма

Исследование свойств спермы включает в себя, среди прочего, определение концентрации сперматозоидов, их подвижности и морфологии (% нормальной формы сперматозоидов).

HALO-тест, SCSA-тест (анализ хроматина сперматозоидов)

Дальнейшие анализы по выявлению молекулярных нарушений в наследственном материале головок сперматозоидов дают дополнительную информацию.

Спермограмма

Основанием для диагностики возможных нарушений мужской фертильности является спермограмма. Здесь исследуются различные параметры эякулята (семенной жидкости). Самые важные из них:

• количество,
• значение pH,
• концентрация сперматозоидов (в миллионах сперматозоидов/мл),
• морфология (доля сперматозоидов нормальной формы в %)
• и моторика (подвижность в %).

Нормы Всемирной организации здравоохранения (критерии ВОЗ):

• Объем 2,0 мл или больше
• Ph 7,2-8,0
• Концентрация сперматозоидов >=20 млн./мл
• Общее чсло сперматозоидов >=40 млн. на эякулят
• Моторика (подвижность) >=50%  с движением вперед или >=25% с быстрой линейной подвижностью
• Морфология >=30%  имеют нормальную форму

Дополнительно оцениваются:

1. лейкоциты < 1 млн./мл
2. МАР-тест < 10% сперматозоидов, покрытых антиспермальными антителами
3. Время разжижения 30 минут, макс. 1 час
4. запах похож на запах цветов каштана

При необходимости проводятся дальнейшие обследования:

доля живых сперматозоидов 75% или более живых клеток, в которые не проникает краситель при тесте с эозином

Примечание:

Морфология часто оценивается в соответствии с так называемыми «строгими критериями Крюгера» или «строгими критериями». Согласно данным критериям доля неправильно сформированных сперматозоидов может составлять до 85% для оценки спермограммы как нормальной.

При определенных условиях анализируемые параметры спермограммы могут сильно меняться, поэтому интервал между проводимыми исследованиями должен быть не менее 2-х (лучше 3-х) месяцев. Процесс образования новых сперматозоидов в яичках требует времени. Перед обследованием необходимо не менее трех и не более пяти дней сексуального воздержания.

К сожалению, на основании дифференцированного микроскопического анализа качества спермы не всегда можно точно оценить способность мужчины к оплодотворению (сделать прогноз фертильности).

сперма до оценки

Тест SCSA (исследование хроматина сперматозоидов), тест HALO

Спермограмма представляет собой самый простой вид исследования, но она дает неполную информацию.

Все большее число исследований, опубликованных в международных журналах, указывает на то, что доля сперматозоидов с хромосомными нарушениями наследственного материала очень важна, с одной стороны, для способности к оплодотворению, а с другой стороны, для определения риска выкидыша. Однако, этот показатель, так называемый индекс фрагментации (ИФ) нельзя определить с помощью нормальной спермограммы (микроскопического исследования качества спермы).

HALO- или SCSA-тест (исследование хроматина сперматозоидов) предлагает возможность определить индекс фрагментации. Дополнительное знание индекса фрагментации в сперме может быть полезным для того, чтобы изначально проводить соответствующее лечение бесплодия.

Это позволит избежать (возможной ретроспективной малоэффективной) терапии, проводимой в течение нескольких месяцев. Причиной этого является возникновение нарушений в наследственном материале сперматозоидов, так называемой фрагментации.

При возрастающем числе женщин уменьшаются шансы забеременеть естественным путем.

У 25% мужчин с нормальными результатами спермограммы выявляется высокая доля сперматозоидов с фрагментацией ДНК. В этих случаях может быть рекомендовано такое лечение, как перенос сперматозоидов в полость матки (осеменение) или ЭКО/ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида).

Поскольку с помощью обычной спермограммы невозможно выявить разрывы несущих наследственную информацию молекул ДНК, требуется дополнительное обследование – тест SCSA (анализ структуры хроматина спермы) или HALO. Мы проводим тест HALO, так как по сравнению с тестом SCSA он проще и дешевле.

Тест HALO дает возможность своевременно назначить индивидуальный курс лечения. Это позволяет экономить время и средства.

Расходы на тест HALO составляют 180,00 евро. Раньше расходы на обследование не возмещались ни государственной, ни частными страховками.

Индекс фрагментации ДНК (DFI) предоставляет информацию о результативности различных методов лечения, при этом оцениваются только сперматозоиды:

фрагментация ДНК 0-15%: беременность естественным путем представляется возможной.

фрагментация ДНК 15-25%: Беременность естественным путем возможна, но ее ожидание может быть долгим.

Если в течение длительного времени не удается забеременеть, следует подумать о возможности проведения хотя бы одного курса осеменения (переноса сперматозоида).

Если, помимо этого, нарушения имеются также и у женщины, а также в более старшем возрасте, рекомендуется проведение ЭКО.

фрагментация ДНК > 30%: Наступление беременности естественным путем или с помощью осеменения представляется маловероятным. Шансы на успех увеличиваются благодаря ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение).

• фрагментация ДНК > 50%: Беременность с помощью ЭКО маловероятна. Более высокие шансы возможны при использовании ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида)
• фрагментация ДНК > 60%: Шансы на успех очень малы; единственный шанс – с помощью ИКСИ или спермы донора.
• Приведенные здесь рекомендации основаны на результатах различных исследовательских групп, полученных за последние годы, и носят лишь рекомендательный характер.

Анализ на фрагментацию ДНК сперматозоидов

Фрагментация ДНК сперматозоида – это повреждение цепочки ДНК, которая содержится в ядре его головки.

Разрывы ДНК приводят к нарушению целостности генетической информации, что снижает качество мужской половой клетки, ставя под сомнение возможность зачатия.

Анализ на определение фрагментации ДНК сперматозоидов назначается при «плохой» спермограмме, когда исследование эякулята показывает следующие состояния:

— Азооспермия – сперматозоидов в сперме нет

— Олигоспермия – недостаточное число сперматозоидов — Тератозооспермия – преобладание сперматозоидов с внешними дефектами

— Незрелых мужских клеток больше нормы по результатам HBА-теста

Эти показатели спермограммы могут указывать на генетическое бесплодие, связанное с фрагментацией ДНК сперматозоидов. Чтобы уточнить диагноз, проводится специальный тест, на основе которого специалист (уролог-андролог) делает прогноз относительно возможного отцовства.

Если, по результатам теста на фрагментацию, сперматозоидов с повреждённой ДНК:

— менее 15%, то препятствий для наступления естественной беременности нет, риск ранних эмбриональных потерь минимален. — от 15 до 30%, то спонтанная беременность возможна, но есть вероятность, что она наступит не сразу, будет сопровождаться осложнениями и может прерваться. — от 30-50%, то зачатие обычным образом маловероятно, есть показания к ЭКО; — более 50-60%, то рекомендуется ЭКО методом ИКСИ (ICSI); — более 60%, то показан метод ИКСИ (ICSI), а в случае неудачи — использование донорской спермы. Примечательно, что сперматозоиды даже с высокой степенью фрагментации ДНК способны оплодотворить яйцеклетку, но эмбрион рано или поздно остановится в развитии, так как повреждённая ДНК в половых клетках оказывает непосредственное влияние на созревание эмбриона в ранний период и формирование бластоцисты. Бластоциста – это эмбрион, достигший 5-6 суток развития, обладающий наивысшими имплантационными способностями. При естественном зачатии эмбрион на стадии бластоцисты попадает в матку, где имплантируется (внедряется в эндометрий). Если, после имплантации эмбрион продолжает нормально развиваться, значит, наступает беременность. Наличие генетических поломок затрудняет имплантацию, а также является препятствием для дальнейшего развития эмбриона. При этом возможны осложнения беременности, выкидыш, появление генетической патологии у плода. Фрагментация ДНК сперматозоидов может встречаться даже у здоровых мужчин. О патологии говорят в случае, если число гамет с поврежденной ДНК выше 40%. В этом случае, фертильность мужчины сомнительна.

К сведению: Под фертильностью понимают способность мужчины к воспроизводству потомства. Происходит слово от латинского fertilis, что значит плодородный, плодовитый.

Повреждение ДНК сперматозоидов происходит по различным причинам, основными из которых являются следующие: — заболевания (варикозное расширение вен семенного канатика, инфекции мочеполовых путей, травмы спинного мозга, лихорадки, хронические воспаления и пр. патологические процессы) — дефицит протаминов и воздействие активных форм кислорода

— неправильное протекание процесса сперматогенеза и созревания сперматозоидов 

У молодых спермиев не активизирован хроматин, необходимый для поддержания целостности ДНК цепей. Если мужская клетка не достигла стадии зрелости, её нуклеиновые цепочки оказываются нарушенными. — возрастной фактор (с возрастом степень фрагментации клеток и число сперматозоидов с повреждённой ДНК возрастает) — внешние факторы (плохая экология, интоксикация, влияние высоких температур)

— специфическое лечение, в т.ч. химио- или радиотерапия.

В организме здорового мужчины действует механизм естественного отбора, в результате которого клетки с поврежденной ДНК уничтожаются. Остаются лишь единицы неполноценных сперматозоидов, которые, как правило, имеют незначительные повреждения ДНК. В ряде случаев яйцеклетка способна самостоятельно восстановить нарушенную целостность ДНК сперматозоида. Однако, здесь имеет важное значение качество яйцеклетки, которое ухудшается с возрастом, а также степень повреждения цепочки ДНК, которое тоже усиливается с годами. Этим объясняется тот факт, что проблемы с зачатием чаще возникают у пар позднего репродуктивного возраста, когда женщине «за 35», а мужчине «за 40». Если механизм естественного отбора даёт сбой, тогда число генетически неполноценных сперматозоидов возрастает.

К сведению. Мужские клетки с повреждённой ДНК могут быть морфологически нормальными и активно двигаться, ничем себя не выдавая. Поэтому, с помощью базовой или расширенной спермограммы определить их невозможно.Проводится специальный тест на фрагментацию сперматозоидов.

Показаниями к оценке фрагментации ДНК сперматозоидов являются: — Беспричинное бесплодие (неясного генеза) при нормальных показателях спермограммы, — Привычное невынашивание беременности у супруги; — Подготовка к лечению бесплодия методами ВРТ; — Неудачные попытки ЭКО в анамнезе; — Криоконсервация спермы; — Поздний возраст мужчины. У мужчин определенный уровень фертильности поддерживается всю жизнь, но с годами эта способность ослабевает — снижается уровень половых гормонов, нарушается процесс сперматогенеза, ухудшается качество спермы. Сперматозоидов становится меньше, большинство из них имеют морфологические дефекты, ненормально большие вакуоли, высокую степень фрагментации ДНК, генные мутации и хромосомные анеуплоидии. Все это приводит к неблагоприятным исходам беременности, врожденным дефектам и заболеваниям у потомства.

На состояние фертильности мужчины оказывают влияние накопленные с возрастом сопутствующие заболевания, в числе которых:

— сосудистая недостаточность (диабет, артериальная гипертензия), — хронические инфекции (простатит и др.), — ожирение, — гормональная недостаточность. Подготовка к анализу на определение степени фрагментации ДНК сперматозоидов:

Воздержание 5-7 дней, исключить тяжелые физические и психические нагрузки, прием алкоголя, воздействие высокой температуры (баня, сауна, повышение температуры тела), согласовать прием лекарственных препаратов с врачом.

Мужское бесплодие. Фрагментация ДНК сперматозоида

Нет, спермограмма отражает другие параметры спермы, такие как концентрация сперматозоидов, их подвижность и морфологию, но она не определяет целостность генетического материала.

ПРИЧИНЫ

Что вызывает поражения ДНК сперматозоида?

Причины могут быть разные, как внутренние, так и вызванные внешними факторами.

К внутренним факторам относится:

• Неэффективная отбраковка: Сперматозоиды вырабатываются в семенниках (тестикулах), Н и в некоторых случаях сперматозоиды и зародышевые клетки обладают генетическими отклонениями, которые проявляются в разрыве ДНК. Такие повреждённые сперматозоиды обычно отбраковываются и удаляются, однако если механизм отбраковки не срабатывает, то в эякуляте присутствуют сперматозоиды с фрагментированной ДНК.
• Неадекватное вызревание: Сперматозоиды проходят процесс вызревания в придатке яичка. Этот процесс вызревания приводит к конденсации хроматина клеточного ядра, что обеспечивает подвижность сперматозоидов. Если этот процесс происходит не должным образом, то ДНК сперматозоидов может быть повреждена.

К внешним факторам относятся:

• Нарушения, связанные с рентгено- и химиотерапией.
• Варикозное расширение вен семенного канатика.
• Повышение температуры тела.
• Воздействие высоких температур.
• Хроническое и острое воспалительное заболевание.
• Оксидативный пост-тестикулярный стресс: В процессе перехода сперматозоидов через эпидидимий может происходить фрагментация ДНК сперматозоидов. В основном это связано с высвобождением невызревшими сперматозоидами либо эпителиальными клетками эпидидимия свободных радикалов, которые оказывают прямое отрицательное воздействие на генетический материал сперматозоида. Кроме того, активация каспаз и эндонуклеаз сперматозоидов в связи с токсическим заражением и воздействием высоких температур также может привести к фрагментации ДНК.

Методы выявления фрагментации днк сперматозоидов

Каким образом можно выявить фрагментацию ДНК сперматозоидов?

Существуют различные методы определения уровней фрагментации. В нашем центре используется TUNEL-тест, рекомендуемый наиболее авторитетными исследователями фрагментации ДНК.

В чём состоит различие между различными методами?

Большинство тестов на фрагментацию, включая тесты SCSA и SCD, замеряют потенциальные повреждения и склонность к денатурализации ДНК, а потому обладают более низкой прогнозирующей способностью. TUNEL-тест, наоборот, замеряет реальные повреждения и обладает высокой прогнозирующей способностью результатов искусственного оплодотворения.

В настоящее время пороговое значение TUNEL-теста, отделяющее норму от патологии, составляет < 15%.
В ходе TUNEL-теста сперматозоиды вступают в реакцию с энзимом, и те из них, у которых фрагментирована ДНК, либо окрашиваются (если используется метод светлого поля), либо начинают светиться зелёным светом (если используется флюоресцентный метод).

Клинические показания

В каких случаях показан тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов?

Этот тест рекомендуется в следующих случаях:

• Идиопатическое бесплодие (по неустановленной причине).
• После неоднократных неудачных попыток искусственного оплодотворения.
• В случае выявления низкого качества эмбриона.
• У пациенток с неоднократно повторяющимися выкидышами.
• Варикозное расширение вен семенного канатика.
• Мужчины в возрасте старше 45 лет.
• Bслучае заморозки спермы (чтобы убедиться, что замороженный образец обладает приемлемым уровнем фрагментации).
• Повышение температуры тела в последние 3 месяца.